Autoprzeciwciała przeciwko receptorom foliowym u kobiet z ciążą powikłaną uszkodzeniem nerwowo-rurkowym czesc 4

Próbki płukano zimnym HBSS w celu usunięcia niezwiązanych białek surowicy, a autoprzeciwciała związane z receptorami folanu eluowano 0,1 M kwasem octowym zawierającym 0,1% albuminy surowicy bydlęcej. Eluat poddano dializie wobec HBSS w temperaturze 4 ° C przez noc i zatężono przez dializę próżniową. Komórki KB (20 000) wysiano w dwóch powtórzeniach na 3,5-cm2 szalkach hodowlanych inkubowano przez noc w 37 ° C z wyizolowanymi autoprzeciwciałami, podobnie traktowaną surowicą kontrolną lub samą pożywką. Komórki przemyto HBSS, pożywkę zawierającą [3H] kwas foliowy (125 .g) dodano do studzienek i inkubację kontynuowano przez 15, 30 i 60 minut w 37 ° C, z duplikatami zestawów inkubowanych w 4 ° C . Komórki ponownie przemyto HBSS w 4 ° C i poddano lizie N wodorotlenkiem sodu i oznaczono radioaktywność. Różnica w radioaktywności między komórkami inkubowanymi w 4 ° C i tymi inkubowanymi w 37 ° C reprezentuje wychwyt komórkowy [3H] kwasu foliowego.
Analizę surowicy od osób z indeksem i grupą kontrolną w kierunku innych autoprzeciwciał wykonano w Universal Diagnostic Laboratory przy użyciu testów immunoenzymatycznych (przeciwciała anty-DNA z Wampol Laboratories, przeciwciała antykardiolipinowe z DiaSorin, przeciwciała przeciwtarczycowe z produktów diagnostycznych).
Analiza statystyczna
Procent kobiet z autoprzeciwciałami do receptora folanowego w obu grupach był porównywany z użyciem dokładnego testu Fishera. Średnie poziomy wiązania [3H] kompleksu kwasu foliowego z folianem w surowicy porównano między grupami za pomocą testu t Studenta; Korekta stopni swobody Satterwaite a została zastosowana ze względu na nierówne wariancje. Zmienne kliniczne w obu grupach porównano z użyciem testu dwóch próbek Wilcoxona i dokładnego testu Fishera. W każdym przypadku zastosowano testy dwustronne; Wartości P równe 0,05 lub mniej były uważane za wskazujące na istotność statystyczną. Użyto oprogramowania SAS (SAS Institute).
Wyniki
Tabela 1. Tabela 1. Charakterystyka kliniczna pacjentów. Tabela przedstawia charakterystykę demograficzną i kliniczną 12 osób z indeksem oraz 20 osób kontrolnych, które były lub były w ciąży. Nie było istotnych różnic między grupami. Inne charakterystyki kliniczne indeksu i osób kontrolnych (w tym cztery kontrole nulligravid, które nie zostały uwzględnione w analizach statystycznych) są podane w Dodatkowych Dodatkach i 2 (dostępne wraz z pełnym tekstem tego artykułu na stronie www.nejm.org).
Ryc. 1. Ryc. 1. Autoprzeciwciała przeciwko receptorom folianowym w surowicy od kobiet z obecną lub wcześniejszą ciążą powikłaną uszkodzeniem nerwowo-rurkowym (przedmioty z indeksu, panel A) i kontrolnymi (panel B). Surowicę od osób z indeksem i grupą kontrolną inkubowano z [3H] receptorami kwasu foliowego znakowanymi kwasem foliowym i 10-krotnym nadmiarem (10 x) receptorów kwasu foliowego nasyconych nieradioaktywnym kwasem foliowym, w celu potwierdzenia specyficzności kompleksu autoprzeciwciała receptora folanowego . Wstawka przedstawia wartości średnie (. SE) uzyskane dla indeksu i osób kontrolnych. Osobnicy kontrolni 1, 2, 3 i 4 byli nulligravidami i zostali wyłączeni z analizy statystycznej, ponieważ nie byli w ciąży
[więcej w: jasnobrązowy stolec, Leukocyturia, cilostazol ]
[patrz też: drożdżaki w kale, jasnobrązowy stolec, mielopatia szyjna leczenie ]