Przypisanie loci mutacji strukturalnych alfa-globiny przez translację hybrydową.

Dwa ludzkie geny alfa-globiny, alfa i alfa 2 znajdujące się w odległości 3,4 kb na chromosomie 16, kodują identyczne białka alfa-globiny. Mutacja w dowolnym genie może skutkować strukturalną hemoglobinopatią. Dopiero od niedawna możliwe stało się przypisanie mutanta łańcucha alfa do jednego z tych dwóch loci przy użyciu technologii rekombinacji DNA. Chociaż jest to ostateczne, to podejście wymagało klonowania i sekwencjonowania określonego genu, o którym mowa. Prezentujemy alternatywne podejście, które skutkuje szybkim i definitywnym przypisaniem mutacji alfa-globiny do kodującego locus genetycznego. To podejście wykorzystuje technikę tłumaczenia hybrydowego. RNA retikulocytów od osób z mutacjami alfa-globiny można frakcjonować na mRNA beta-, alfa 9 (całkowite) -, alfa i alfa 2-globiny przez selektywną hybrydyzację każdego gatunku mRNA z odpowiadającym mu komplementarnym DNA (cDNA) immobilizowanym na papier nitrocelulozowy. Każdy oczyszczony w ten sposób mRNA może ulegać translacji in vitro, a gatunki mRNA (a więc i locus genu) kodujące mutanta globiny można następnie bezpośrednio zidentyfikować za pomocą analizy żelowej radioznakowanych produktów translacji. Ta procedura może być stosowana do identyfikacji mutantów globin jako alfa lub beta i do lokalizowania mutantów alfa-globiny do genu alfa lub alfa 2. Użyliśmy tej techniki do zlokalizowania dwóch alfa-globinowych mutantów, alfa 125Pro (Hb Quong Sze) i alfa 47HIS (Hb Hasharon), do locus alfa 2. To podejście mogłoby potencjalnie zostać rozszerzone, aby służyć jako alternatywa dla analizy peptydów do wstępnej charakteryzacji wszystkich strukturalnych mutantów globiny
[przypisy: hbsag badanie, talasemie, mefedron opinie ]