Genotyp promotora 5-lipooksygenazy arachidonianu, dietetycznego kwasu arachidonowego i miażdżycy tętnic

Leukotrieny to mediatory zapalne wytwarzane z kwasu arachidonowego (wielonienasycone kwasy tłuszczowe n-6) przez enzym 5-lipoksygenazę. Ponieważ miażdżyca wiąże się z zapaleniem tętnic, postawiliśmy hipotezę, że polimorfizm w promotorze genu 5-lipoksygenazy może odnosić się do miażdżycy u ludzi i że ten efekt może wchodzić w interakcje z dietetycznym przyjmowaniem konkurujących substratów 5-lipooksygenazy. Metody
Określiliśmy genotypy 5-lipoksygenazy, grubość intima-media tętnic szyjnych i markery stanu zapalnego w kohorcie losowo wybranych 470 zdrowych, kobiet w średnim wieku i mężczyzn z badania miażdżycowego w Los Angeles. Dietetyczny kwas arachidonowy i morskie kwasy tłuszczowe n-3 (w tym konkurujący substrat 5-lipooksygenazy, który zmniejsza produkcję zapalnych leukotrienów) mierzono za pomocą sześciu 24-godzinnych wycofań z przyjmowania pokarmu.
Wyniki
Warianty wariantu 5-lipoksygenazy (bez powszechnego allelu) stwierdzono w 6,0 procentach kohorty. Continue reading „Genotyp promotora 5-lipooksygenazy arachidonianu, dietetycznego kwasu arachidonowego i miażdżycy tętnic”

Genotyp promotora 5-lipooksygenazy arachidonianu, dietetycznego kwasu arachidonowego i miażdżycy tętnic ad 8

Jednak szlaki zapalne są nadmiarowe i oddziałują, 41 i regulacja w dół szlaku 5-lipoksygenazy może powodować regulację w górę innych szlaków eikozanoidów42. Inne potencjalne szlaki eikozanoidów do promowania miażdżycy obejmują szlaki 15-lipoksygenazy i cyklooksygenazy 2 43.44, które są również zróżnicowane pod względem spożycia przez dietę n-6 i morskich wielonienasyconych kwasów tłuszczowych n-3.29,45 Jednak dowody na aterogenne działanie tych innych szlaków eikozanoidalnych są mieszane, 11,46,47 i n -3 wielonienasycone kwasy tłuszczowe mają znacznie silniejszy wpływ na produkcję leukotrienów niż na inne eikozanoidy.45 Innym możliwym mechanizmem wiążącym regulację w dół 5-lipooksygenazy z miażdżycą tętnic u nosicieli wariantowych genotypów byłaby zmniejszona biosynteza transkomórkowa przeciwzapalnych produktów 5-lipoksygenazy, takich jak lipoksyny. 48 Jednak taki model jest niezgodny z interakcjami dieta-gen, które obserwowaliśmy i ze znacznym zmniejszeniem miażdżycy u myszy z niedoborem 5-lipoksygenazy.9
Słabości naszego badania wynikają z jego obserwacyjnego projektu. Ta zmienność polimorficzna 5-lipoksygenazy może zostać zakłócona przez nieoznaczone czynniki środowiskowe lub genetyczne. Duża jasność widocznego wpływu genotypu w porównaniu z innymi czynnikami ryzyka miażdżycy powoduje, że pomylenie ze znanymi czynnikami ryzyka jest mało prawdopodobne. Continue reading „Genotyp promotora 5-lipooksygenazy arachidonianu, dietetycznego kwasu arachidonowego i miażdżycy tętnic ad 8”

Wykorzystanie kwasów arachidonowych i linolowych przez hodowane ludzkie komórki śródbłonka.

Gdy hodowane ludzkie komórki śródbłonka żyły pępowinowej są uzupełniane kwasem linolowym, zawartość kwasu arachidonowego w fosfolipidach komórkowych zmniejsza się o około 35%. Większość zmian składu kwasów tłuszczowych zachodzi podczas pierwszych 24 godzin. Jednym z czynników odpowiedzialnych za ten efekt jest niezdolność komórek śródbłonka do zamiany znaczących ilości kwasu linolowego na kwas arachidonowy, z powodu niedoboru delta 6-desaturazy kwasu tłuszczowego. Przeciwnie, te kultury śródbłonka zawierają aktywność delta 5- i delta 9-desaturazy i są zdolne do wydłużania długołańcuchowych wielonienasyconych kwasów tłuszczowych. Innym czynnikiem, który przyczynia się do zmniejszenia kwasu arachidonowego jest to, że wysokie stężenia kwasu linolowego zmniejszają wprowadzanie arachidonianu do fosfolipidów komórkowych. Continue reading „Wykorzystanie kwasów arachidonowych i linolowych przez hodowane ludzkie komórki śródbłonka.”

Przypisanie loci mutacji strukturalnych alfa-globiny przez translację hybrydową.

Dwa ludzkie geny alfa-globiny, alfa i alfa 2 znajdujące się w odległości 3,4 kb na chromosomie 16, kodują identyczne białka alfa-globiny. Mutacja w dowolnym genie może skutkować strukturalną hemoglobinopatią. Dopiero od niedawna możliwe stało się przypisanie mutanta łańcucha alfa do jednego z tych dwóch loci przy użyciu technologii rekombinacji DNA. Chociaż jest to ostateczne, to podejście wymagało klonowania i sekwencjonowania określonego genu, o którym mowa. Prezentujemy alternatywne podejście, które skutkuje szybkim i definitywnym przypisaniem mutacji alfa-globiny do kodującego locus genetycznego. Continue reading „Przypisanie loci mutacji strukturalnych alfa-globiny przez translację hybrydową.”

Zachowanie współczynnika ultrafiltracji kłębuszkowego kłębka podczas nerkowego nefrotoksycznego zapalenia nerek w surowicy przez specyficznego antagonistę receptora leukotrienowego D4.

Leukotrien D4, silnie aktywna biologicznie lipooksygenaza pochodna kwasu arachidonowego w aktywowanych leukocytach, obniża współczynnik ultrafiltracji kłębuszkowej (Kf) i konwertuje komórki mezangialne w hodowli. W związku z tym zbadaliśmy jego potencjalną rolę w pośredniczeniu w zmniejszeniu szybkości filtracji nefronu po indukcji nerkowego zapalenia nerek wywoływanego przez doświadczalne nefrotoksyczne (NTS). Pomiary mikropunktów przeprowadzono na szczurach euvolemicznych w Monachium-Wistar 2 godziny po podaniu dożylnym 0,8 ml surowicy króliczej (grupa 1, n = 6), 0,8 ml króliczego anty-szczurzego przeciwciała kłębuszkowego z błon podstawnych pod nieobecność (grupa 2, n = 8) lub obecność (grupa 3, n = 7) nowego wysoce specyficznego antagonisty receptora LTD4 SK & F 104353. Ilościowe wiązanie przeciwciała i nacieki neutrofili nie wykazały różnic między grupami 2 i 3. Antagonizm endogennych działań LTD4 był jednak związany. Continue reading „Zachowanie współczynnika ultrafiltracji kłębuszkowego kłębka podczas nerkowego nefrotoksycznego zapalenia nerek w surowicy przez specyficznego antagonistę receptora leukotrienowego D4.”

Zmiany kształtu, egzocytozy i cytozolowych wolnych zmian wapnia w stymulowanych ludzkich eozynofilach.

Zasadniczo czyste preparaty eozynofilów o normalnej gęstości otrzymane od pacjentów z zespołem hipereozynofilowym (HES) stymulowano czynnikiem dopełniacza 5a (C5a), czynnikiem aktywującym płytki (PAF), FMLP i peptydem aktywującym neutrofile (NAP-1 / IL-8). Badano trzy odpowiedzi, przejściowy wzrost stężenia wolnego wapna cytozolowego ([Ca2 +] i) (pochodzącego z fluorescencji indo-1), zmiany kształtu (mierzone za pomocą turbidymetrii laserowej) i egzocytozę peroksydazy eozynofili (EPO) (ocenianą za pomocą H2O2 / zależna od luminolu chemiluminescencja). Odpowiedzi uzyskano dla wszystkich czterech agonistów, ale C5a i PAF były o wiele silniejsze niż FMLP i NAP-1 / IL-8, które wywoływały jedynie niewielkie efekty. Wstępne traktowanie komórek toksyną krztuścowej osłabiło zmiany [Ca2 +] i, uwalnianie EPO i, w mniejszym stopniu, zmiany kształtu, wskazując, że białka wiążące GTP typu Gi są zaangażowane w procesy transdukcji sygnału zależne od receptora prowadzące do tych odpowiedzi. Wyraźną dysocjację zaobserwowano w kontroli odpowiedzi na zmianę kształtu i egzocytozy EPO. Continue reading „Zmiany kształtu, egzocytozy i cytozolowych wolnych zmian wapnia w stymulowanych ludzkich eozynofilach.”

1,25-dihydroksywitamina D3 stymuluje komórki osteoblastyczne szczura do uwolnienia rozpuszczalnego czynnika, który zwiększa osteoklastyczną resorpcję kości.

Chociaż 1,25-dihydroksywitamina D3 stymuluje osteoklastyczną resorpcję kości in vivo i w hodowli narządów, mechanizm, w którym wpływa ona na tę stymulację, jest nieznany. Niedawno odkryliśmy, że środek nie stymuluje resorpcji przez osteoklasty mechanicznie dezagregowane z kości i inkubowane na plastrze kości korowej. Sugeruje to, że osteoklasty zostały usunięte poprzez dezagregację z wpływu niektórych typów komórek obecnych w nienaruszonej kości, które pośredniczą w reakcji hormonalnej. W związku z tym przetestowaliśmy zdolność komórek osteoblastycznych pochodzących z kalwarii noworodków szczurów i sklonowanych komórek osteosarcoma reagujących na hormony (UMR106) w celu przywrócenia reakcji hormonalnej na niereagujące populacje osteoklastów. Stwierdziliśmy, że komórki osteoblastyczne z obu źródeł wywoływały dwu- do czterokrotną stymulację osteoklastycznej resorpcji kości w obecności 1,25-dihydroksywitaminy D3. Continue reading „1,25-dihydroksywitamina D3 stymuluje komórki osteoblastyczne szczura do uwolnienia rozpuszczalnego czynnika, który zwiększa osteoklastyczną resorpcję kości.”

Lisofosfatydylocholina transkrypcyjnie indukuje ekspresję genów czynnika wzrostu w hodowanych ludzkich komórkach śródbłonka.

Lizofosfatydylocholina (lizo-PC) jest głównym fosfolipidowym komponentem aterogennych lipoprotein (np. Utlenionych LDL i beta-VLDL), a także może być generowana przez działanie wydzielanej przez leukocyt fosfolipazę A2 w miejscach zapalenia. Wcześniej informowaliśmy, że lizo-PC może aktywować hodowane endoteliny, co powoduje selektywną regulację w górę cząsteczek adhezyjnych, takich jak cząsteczka adhezyjna komórek naczyniowych-1 i międzykomórkowa cząsteczka adhezyjna-1. W badaniu tym stwierdziliśmy, że lizo-PC zwiększa poziomy mRNA w stanie równowagi dla dwóch czynników wzrostu mięśni gładkich / skierowanych na fibroblast, łańcuchów A i B PDGF i białka wiążącego EGF podobnego do heparyny (HB-EGF), w hodowlach. ludzkie komórki śródbłonka. Continue reading „Lisofosfatydylocholina transkrypcyjnie indukuje ekspresję genów czynnika wzrostu w hodowanych ludzkich komórkach śródbłonka.”

Nieprawidłowa funkcja limfocytów B z krwi obwodowej pacjentów ze szpiczakiem mnogim. Brak korelacji między liczbą komórek potencjalnie zdolnych do wydzielania immunoglobuliny M i poziomów immunoglobulin w surowicy.

Pacjenci ze szpiczakiem mnogim wykazują niedobór normalnych immunoglobulin poliklonalnych w surowicy. Aby określić przyczyny tego spadku, oceniliśmy ilościowo i porównaliśmy liczbę limfocytów powierzchniowych IgM + B oraz liczbę komórek B podatnych na transformację wirusem Epsteina-Barra (EBV) o stężeniu IgM w surowicy. Stężenia IgM w surowicy różniły się znacznie u poszczególnych pacjentów, czasowo zmieniając się z niewykrywalnych na normalne ilości, a następnie spadając ponownie do poziomu niewykrywalnego. Przejściowy wzrost do normalnych stężeń IgM w surowicy zaobserwowano u 42% pacjentów ocenianych w dwóch lub więcej punktach czasowych. Spośród 44 pacjentów 52% wykazało brak korelacji pomiędzy liczbą komórek B IgM + (sIgM +) powierzchniowych a stężeniem IgM w surowicy. Continue reading „Nieprawidłowa funkcja limfocytów B z krwi obwodowej pacjentów ze szpiczakiem mnogim. Brak korelacji między liczbą komórek potencjalnie zdolnych do wydzielania immunoglobuliny M i poziomów immunoglobulin w surowicy.”

Produkt D degradacji fibrynogenu indukuje oderwanie komórek śródbłonka przez aktywację fibrynolizy za pośrednictwem komórek.

Przeanalizowaliśmy wpływ fragmentu D produktu degradacji fibrynogenu (FDP) na spójność pojedynczej warstwy śródbłonka oraz mechanizmy oderwania komórek śródbłonka wywołanego fragmentem D od podłoża. Inkubacja bydlęcych komórek śródbłonka płucnego (BPAEC) z fragmentem D powodowała zależne od stężenia i czasu odłączanie komórek od podłoża. Optymalna odpowiedź wystąpiła przy stężeniach fragmentu D 2 mikroM i wymagała czasu inkubacji 24 godziny. BPAEC poddany prowokacji fragmentem D zwiększył stężenie i aktywność aktywatora plazminogenu typu urokinazy (uPA) w kondycjonowanej pożywce w ciągu 2 do 4 godzin inkubacji. Fragment D również indukował uwalnianie tkankowego aktywatora plazminogenu, ale w mniejszym stopniu niż uPA. Continue reading „Produkt D degradacji fibrynogenu indukuje oderwanie komórek śródbłonka przez aktywację fibrynolizy za pośrednictwem komórek.”